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植物硝酸還原酶(NR)ELISA試劑盒

更新時間：2024-07-05

簡要描述：

植物硝酸還原酶(NR)ELISA試劑盒廠家應用雙抗體夾心法測定標本中硝酸還原酶(NR)水平。用純化的硝酸還原酶(NR)捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入硝酸還原酶(NR)，再與HRP標記的檢測抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。

型號：96T/48T點擊量：1303

供貨周期現(xiàn)貨應用領域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合
　　植物硝酸還原酶(NR)ELISA試劑盒廠家
 
　　一、實驗原理：
 
　　本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中硝酸還原酶(NR)水平。用純化的硝酸還原酶(NR)捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入硝酸還原酶(NR)，再與HRP標記的檢測抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的硝酸還原酶(NR)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中硝酸還原酶(NR)含量。
 
　　二、植物硝酸還原酶(NR)ELISA試劑盒組成：
 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1份

1份

  

封板膜

2片

2片

  

密封袋

1個

1個

  

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標準品

0.3ml×6管

0.3ml×6管

2-8℃保存

酶標試劑

5 ml×1瓶

10 ml×1瓶

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

顯色劑A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

顯色劑B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

終止液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

20×濃縮洗滌液

15ml×1瓶

25ml×1瓶

2-8℃保存

 

　　三、樣本處理及要求：
 
　　1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。
 
　　2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
 
　　3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
 
　　4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
 
　　5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
 
　　6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
 
　　7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
 
　　四、操作步驟
 
　　1、標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
 
　　2、加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
 
　　3、加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。
 
　　4、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
 
　　5、配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
 
　　6、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
 
　　7、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
 
　　8、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。
 
　　9、測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
 
　　五、注意事項：
 
　　1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。樣本在使用前也要在室溫平衡60分鐘。
 
　　2、濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
 
　　3、各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
 
　　4、請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
 
　　5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
 
　　6、底物請避光保存。
 
　　7、嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
 
　　8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
 
　　9、本試劑不同批號組分不得混用。
 
　　10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
 
　　六、計算：
 
　　以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
 
　　七、試劑盒性能：
 
　　1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.95以上。
 
　　2.批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應分別小于10%和15% 。
 

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